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      BD C6流式細胞儀測定細胞周期的步驟

      更新時間:2017-03-21瀏覽:4580次
       BD C6流式細胞儀測定細胞周期的步驟:
       
      1)將細胞以1×106接種于60mm培養板,80%匯合后轉染,或者按照計劃的方案處理。
       
      2)24小時后在新鮮培養液中加入適當的抗生素(真核表達載體上的抗性標記)進行培養(該步可選)。
       
      3)48-72小時后用胰酶消化(或者用細胞刮子)收集細胞,PBS(加入FBS使終濃度為1-3%)洗兩遍,棄上清,加入1ml70%預冷乙醇中,吹打均勻,-20℃或4℃固定12小時以上。
       
      4)PBS(加入FBS使終濃度為1-3%)洗滌去乙醇,1000rpm,5min,洗兩遍。
       
      5)0.5mlPBS重懸細胞,加入PI和RNaseA至終濃度50?g/ml,37℃(或室溫下)溫浴30min。
       
      6)用BD C6流式細胞儀測定周期。
       
      PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
       
      RNaseA:10mg/ml
       
      應用:通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數,可檢測細胞的增殖、凋亡。
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